Om niet-specifieke antilichaambinding te verminderen en bijgevolg het achtergrondsignaal te verminderen, wordt aanbevolen om een blokkerende oplossing te gebruiken voorafgaand aan incubatie met antilichamen De meest effectieve blokkerende oplossing zal kan dat zijn dat serum bevat van dezelfde soort waarin het secundaire antilichaam is opgewekt.
Hoe voorkom je achtergrondvlekken?
Het verminderen van de dikte van weefselcoupes kan helpen om achtergrondkleuring te verminderen. Probeer dunnere secties te snijden voor schonere IHC. Het is ook belangrijk om ervoor te zorgen dat de secties niet uitdrogen, aangezien drogen kan leiden tot hoge niet-specifieke vlekken.
Hoe optimaliseer je immunofluorescentie?
Immunofluorescentiemicroscopie: 10 technische tips voor succes
- Celfixatie en permeabilisatie. …
- Antilichaam specificiteit. …
- Gebruik de juiste antilichaamverdunning. …
- Buffers en blokkeringsagenten optimaliseren. …
- Een geschikte celdichtheid gebruiken. …
- Meervoudige kleuring. …
- Secundaire antilichamen. …
- Achtergrond verkleinen.
Wat veroorzaakt achtergrondkleuring?
Achtergrondkleuring kan worden veroorzaakt door ongepaste antilichaambinding of door fouten tijdens de voorbereiding van het weefselglaasje.
Verminderen secundaire antilichamen achtergrondsignalen?
F(ab)-specifieke secundaire antilichamen kunnen het achtergrondsignaal helpen verminderen door niet-specifieke binding van de IgG-eiwitten die door het secundaire antilichaam in weefsels worden aangetroffen, te elimineren.
